1.配制
标记缓冲液：0.2M NaHCO3 (pH=9.0)；
标记终止缓冲液： 10% 赖氨酸 0.2M NaHCO3 (pH=9.0)溶液；
脱盐纯化缓冲液：0.1M Na2HPO4-NaH2PO4 (pH=6.5)；
德晟吖啶酯激发A： 0.1% H2O2 ，0.1M HNO3。激发液B：0.2M NaOH，2%Trinon-100
2. 计算标记所用抗体（蛋白质）和吖啶酯的量
通常设定摩尔比n(抗体): n(吖啶酯)=1:10~1:50，具体需根据氨基酸组分进行摸索调整；
配制2.5mg/ml 德晟吖啶酯-DMSO母液，注意玻璃器皿盛放并避光；
使用0.2M NaHCO3（pH=9.0） 溶液配制0.1~0.5 mg/ml 抗体反应液
3. 连接及纯化
本说明书举例针对标记抗体抗体的分子量为 180Kd 对应 15 倍的德晟吖啶酯。如果用户的待标记样品是其他的分子量，请参考附表 1 改变试剂的配比；
取 10 μL 稀释吖啶酯母液 (2.5mg/ml)，加入 90 μL 无水 DMSO(or DMF) 稀释10倍，配成吖啶酯工作液 (0.25mg/ml)；
使用0.2M NaHCO3(pH=9.0)溶液稀释 50μg 的抗体至 300 μL，加入 10 μL吖啶酯工作液 (0.25mg/ml)（参考附表 1）；
锡箔纸包好，室温标记0.5~1h；
淬灭反应，加入 100 μL 标记终止缓冲液，室温混匀 30 分钟（注：如果标记较充分，也可以跳过此步骤，直接进行柱纯化）；
脱盐柱纯化，收集吖啶标记蛋白组分并检测浓度，请参考说明书后文；
检测标记的蛋白，取10μL吖啶标记蛋白，放于黑色96孔板中，向每个微孔注入 50 μL吖啶酯激发液A，1秒后，自动加入50μL激发液B，立即检测，如果发光过强，可以对标记蛋白再进行若干倍的稀释，使其在仪器的发光检测限内；
德晟吖啶酯标记的蛋白可以在酸性缓冲液中4℃避光存储（注意补加叠氮钠等防腐剂），如果储存效果不佳，则请避光保存于-20℃或者-80℃；
注意事项
吖啶酯除了DMF，也可以用无水DMSO等非质子性溶剂来溶解。通常德晟吖啶酯用DMF高溶解的浓度为4mM (约2.7mg/ml)，我司生产的吖啶酯中DMSO中溶解度可达10mg/ml。
标记前，由于吖啶酯末端羧基经NHS活化,较为活泼，请用非质子性的干燥无水溶剂来溶解；标记后，标记后吖啶酯与被标记物之间以酰胺键或者酯键等形式存在，酸性溶剂基本没有影响；吖啶酯本身活性位点在碱性和氧化环境下不稳定，因此应根据被标记物的稳定性配制相应的非强碱性非氧化的体系中处理和保存。
发光标记物在光照条件下有可能部分分解，以致影响发光效果。吖啶酯的实验操作和储存建议避光条件下处理，目前暂时没有具体的研究数据。
吖啶酯标记蛋白等大分子化合物建议用G25脱盐柱分离；吖啶酯标记小分子化合物建议用柱层析分离;
