吖啶酯是一种非常有优势的化学发光标记物,它的稳定性,活性和敏感性超过了那些放射性同位素。所以在使用吖啶酯的时候,需要先了解一些关于它的相关信息。下面是德晟整理出来关于吖啶酯的问题仅供大家参考。
1. 吖啶酯在DMF中的溶解度MAX多少?
答:吖啶酯用DMF高溶解的浓度:4mM
2. 吖啶酯避光的要求严格吗?
答: 发光标记物在光照条件下有可能部分分解,以致影响发光效果。吖啶酯的实验操作和储存建议避光条件下处理,目前暂时没有具体的研究数据。
3. 吖啶酯在什么环境下稳定和不稳定?
答:稳定:在酸性溶液中(pH<4.8)都很稳定,与蛋白质偶联物在室温下保存4周,其光量子产率不降低,冻干品在-20℃下,可以保存一年以上。
不稳定:吖啶酯在碱性和氧化环境下均不稳定,易分解。另外,发光标记物在光照条件下有可能部分分解,以致影响发光效果。
4. 吖啶酯除了DMF还可以用什么溶剂来溶解?
答:除了DMF,也可以用无水DMSO等非质子性溶剂来溶解。
5. 吖啶酯的溶剂有什么要求?
答:标记前:由于吖啶酯末端羧基经NHS活化,较为活泼,请用非质子性的干燥无水溶剂来溶解;
标记后:标记后吖啶酯与被标记物之间以酰胺键或者酯键等形式存在,质子性溶剂基本没有太大影响;吖啶酯本身活性位点在碱性和氧化环境下不稳定,此时应根据被标记物的稳定性配制相应的非强碱性非氧化的体系中处理。
6. 吖啶酯标记后如何分离纯化?
答: 吖啶酯标记蛋白等大分子化合物建议用G25脱盐柱分离;吖啶酯标记小分子化合物建议用柱层析分离。
7. 吖啶酯发光时间短暂该使用什么采集数据?
答:吖啶酯发光过程是十分短暂(整个过程的发生小于2秒),触发方案必须增加内部光度计和光子探测器;另外,本产品可以使用配备自动进样器的多功能酶标仪进行发光数据采集,较大限度降低加样时间对采集信号的影响。
8. 吖啶酯DMAE-NHS的热稳定性
吖啶酯-DMAE-NHS的热稳定性随pH值增大和温度升高而降低。室温下,DMAE-NHS在pH为5.8、7.0、8.0的PB缓冲液中均较稳定。16天后,发光活性分别降低1.6%、3.6%和8.3%。在37℃下,DMAE-NHS在pH为5.8、7.0和8.0的PB缓冲液中,16天后发光活性分别降低8.9%、22%和42%。DMAE-NHS在PB缓冲液中的发光活性随时间而降低的原因是因为发生水解,在碱性环境中有利于水解,升高温度也有利于水解,即DMAE-NHS的水解速度随溶液pH值增大和温度升高而加快。
9. 化学发光检测性能的几个重要的磁微粒参数
尽管微球通常是均一分散的,能在CLIA分析仪中保持悬浮状态,但如果未在分析仪中充分搅拌,粒径较大的微球仍可能发生沉降。较小粒径的微球具有更高的比表面积,可提高蛋白负载率,从而增强检测灵敏度。但粒径较小的微球需要的分离时间也更久。鉴于上述原因,CLIA检测常使用的是约1-2 μm的中型微球,因为它们恰好是粒径适中的方案。