化学发光试剂吖啶酯有很多类型,一般统称吖啶酯类,还包括吖啶盐、吖啶磺酰胺、吖啶羧酸等,那么它们之间有什么区别呢?
目前德晟研发的吖啶酯类化学发光试剂共有六种,分别在传统吖啶酯的基础上进行了官能团的取代,在发光性能、稳定性和便于标记蛋白、抗体方面做了优化改性。传统吖啶酯及六种新型吖啶酯如下:
0# AE-NHS
1# DMAE-NHS
2# Me-DMAE-NHS
3# NSP-DMAE-NHS
4# NSP-SA-NHS
5# NSP-SA
6# NSP-SA-ADH
抗水解性不同:
传统吖啶酯0#(AE-NHS),1~3#在其结构上进行了修饰,增大了位阻,增强了抗水解性。0#只在酸性溶液中稳定,当pH值大于6.3后易水解,而1~3#则不然,如在室温下,在pH为7.0的PB缓冲液中很稳定,16天后,发光活性只降低3.6%。
稳定性不同:
4#、5#、6#吖啶酯则是引入了磺酰胺基团,其稳定性较吖啶酯类(0#、1#、2#、3#)高,其原因是由于C-N键与C-O键的键级不同,C-N键大于C-O键。吖啶酰胺类化合物(4~6#)抵抗水解的能力也强于吖啶酯类(0~3#)化合物。4~6#在酸性溶液中(pH<4.8)都很稳定,与蛋白质偶联物在室温下保存4周,其光量子产率不降低,冻干品在-20℃下,可以保存一年以上。
发光原理相同,离去基团不同:
吖啶酯和吖啶磺酰胺的反应机理是相同的,只是离去基团不团。在碱性条件下,过氧化氢与吖啶的9位碳原子发生加成,加成产物在碱性条件下形成的过氧负离子再亲核进攻羰基碳,离去基团离去并进一步形成不稳定的四元环中间体1,2-二氧杂环丁烷酮,开环后形成激发态的吖啶酮,其返回到基态的过程中释放出光子,波长为470nm。吖啶酯和吖啶磺酰胺的离去基团分别为-OR和-NR(SO2R),当离去基团上R3,R4为给电子基团时(如R3,R4 =CH3),能起到增大空间位阻的同时降低羰基亲电性。
吖啶酯发光原理
除了上述几点外,不同吖啶酯的亲水性也有差异,另外离去基团上不同的R基团也是的它们的表及方法有差异,需要根据所标记的蛋白、抗体来作选择。