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化学发光试剂吖啶酯、吖啶盐等的区别

发表时间:2023-08-10

化学发光试剂吖啶酯有很多类型,一般统称吖啶酯类,还包括吖啶盐、吖啶磺酰胺、吖啶羧酸等,那么它们之间有什么区别呢?


目前德晟研发的吖啶酯类化学发光试剂共有六种,分别在传统吖啶酯的基础上进行了官能团的取代,在发光性能、稳定性和便于标记蛋白、抗体方面做了优化改性。传统吖啶酯及六种新型吖啶酯如下:

0# AE-NHS

1# DMAE-NHS

2# Me-DMAE-NHS

3# NSP-DMAE-NHS

4# NSP-SA-NHS

5# NSP-SA

6# NSP-SA-ADH


抗水解性不同:

传统吖啶酯0#AE-NHS),13#在其结构上进行了修饰,增大了位阻,增强了抗水解性。0#只在酸性溶液中稳定,当pH值大于6.3后易水解,而13#则不然,如在室温下,在pH7.0PB缓冲液中很稳定,16天后,发光活性只降低3.6%。


稳定性不同:

4#5#6#吖啶酯则是引入了磺酰胺基团,其稳定性较吖啶酯类(0#1#2#3#)高其原因是由于C-N键与C-O键的键级不同,C-N键大于C-O键。吖啶酰胺类化合物(46#)抵抗水解的能力也强于吖啶酯类(03#)化合物。46#在酸性溶液中(pH<4.8)都很稳定与蛋白质偶联物在室温下保存4其光量子产率不降低冻干品在-20℃可以保存一年以上


发光原理相同,离去基团不同:

吖啶酯和吖啶磺酰胺的反应机理是相同的,只是离去基团不团。在碱性条件下,过氧化氢与吖啶的9位碳原子发生加成,加成产物在碱性条件下形成的过氧负离子再亲核进攻羰基碳,离去基团离去并进一步形成不稳定的四元环中间体12-二氧杂环丁烷酮,开环后形成激发态的吖啶酮,其返回到基态的过程中释放出光子,波长为470nm。吖啶酯和吖啶磺酰胺的离去基团分别为-OR-NRSO2R),当离去基团上R3R4为给电子基团时(如R3R4 =CH3),能起到增大空间位阻的同时降低羰基亲电性。


 

吖啶酯发光原理

除了上述几点外,不同吖啶酯的亲水性也有差异,另外离去基团上不同的R基团也是的它们的表及方法有差异,需要根据所标记的蛋白、抗体来作选择。

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