化学发光底物吖啶酯可以直接标记蛋白、抗体、核酸等，不同的吖啶酯其标记方法也有差异，大致的标记方法类型将在本文作简介。

按照标记物的应用可以分为化学标记和生物标记；标记的对象可以是小分子物质，如甾体激素、药物等，也可以是大分子物质，如蛋白质、抗体、抗原、核酸以及某些配基、和载体；标记的过程可以是直接偶联(如碳二亚胺缩合）或间接偶联（如琥珀酰亚胺活化）。

吖啶酯发光底物

碳二亚胺（EDC）缩合法：

此法可用于蛋白质分子中游离羧基或氨基的标记，常用缩合剂有EDC、DCC等。5 号为吖啶酯NSP-SA为含羧酸基团的吖啶酰胺，需要加入缩合剂 EDCI 等，才能与含胺基的蛋白发生偶联反应。

重氮盐偶联法（重氮化）：

此法简易、成本低、重复性好，但不适用于脂肪伯氨基发光剂，因其生产的重氮盐不稳定，且异鲁米诺衍生物ABEI等伯伯胺基位于侧链的也不适用。

琥珀酸酐法（环内酸酐法）：

此法没有双功能交联剂的不良反应，能实现标记物和蛋白质分子间的单向定量缩合，标记效率高，商品化试剂供应成熟。我们含有NHS活化基团的吖啶酯（ 1～4 号）都属于这一类，能与抗体、蛋白的胺基进行偶联，直接标记。

还有异鲁米诺常用的异硫氰酸酯衍生物法，以及过碘酸盐氧化法、戊二醛法、O-（羧甲基）羟胺法、混合酸酐法，但由于或多或少的使用限制，不去前几种广泛。

一般来说鲁米诺等酶促化学发光底物通常不直接标记，鲁米诺氨基发生取代后发光性能受到显著影响（异鲁米诺则可以改善），所以通常采用催化的酶（如HRP、POD、GOD）和/或协同因子（如ATP、辅酶NAD等）来标记抗体或抗原。但是吖啶酯的优势是可以连接带有能够标记的基团，可直接标记抗体或核酸，发光性能几乎无影响。

综上所述，德晟的六种吖啶酯除了抗水解性、亲水性的不同外，其标记方法也是有差异的，大家可以根据标记的蛋白、抗体类型作选择。