分析现有转运鼻咽拭子病毒标本的液体培养基可以看出,目前液体培养基主要关注两类问题,一方面是液体培养基配方本身的性能问题,需解决非灭活型保存液如何更完整地保存病毒的原始性状及活性,灭活型保存液如何灭活病毒的同时有效保护核酸不被核酸酶降解,各种保存液如何保证样本保存液采集标本后的存储条件温和且保存时间尽量延长等问题;另一方面关注的问题主要是保存液如何提高产品稳定性及灭活型。在这两方面,德晟公司针对做出了相应的处理。
非灭活型保存液——提高产品稳定性
因市面上很多现有的非灭活型样本保存液成分富含氨基酸、蛋白质等营养物质容易滋生微生物,且抗生素类物质无法耐受高温、辐照等灭菌方式。为了保持产品的稳定性,德晟研发生产的非灭活病毒保存液是不含裂解盐,但是保存的病毒完整性更好,检出率更高,除了核酸检测外还可以用于其他研究。它具有抗细菌和抗真菌的作用;牛血清白蛋白(BSA)作为蛋白质稳定剂,可在病毒的蛋白质外壳形成一种保护膜,使其不易分解,保证病毒的完整性;Hanks缓冲液构建的中性环境,有助于增加病毒的生存时间和感染稳定性。再就是对菌落的控制我们是非常严格的,以免产品出现长菌现象。
灭活型保存液——提高产品灭活性
关于灭活型样本保存液的相关研究表明,常用的病毒裂解剂 AVL 和 RLT 缓冲液处理后的病毒仍然存活,这提示我们对灭活型样本保存液针对特定病毒的灭活能力应当进行相应的临床评估。还有研究表明,一旦加入乙醇,AVL 就可以完全灭活 EBOV 病毒,但这与下游自动核酸提取系统不兼容。这提示我们改进灭活型样本保存液的同时还应验证对下游核酸提取及检测的影响。
和高校专家独家研制的灭活型病毒保存液,含有特殊的蛋白变性剂和核酸稳定剂,蛋白变性剂可以迅速破坏病毒外壳蛋白质的二级结构,将病毒灭活。当带有新冠病毒的临床样本与保存液混合,样本中的病毒受裂解液作用,蛋白质外壳被迅速破坏,并且这种破坏是不可复原的。核酸稳定剂可以常温稳定保存病毒核酸不降解,可以在37℃条件下稳定保存7天,非常利于核酸检测的样本保存。